E.coli O157:H7 bakterisinin belirlenmesi için kullanılan analizler klasik ve hızlı yöntemler olarak iki grupta toplanabilir. Klasik yöntemler selektif zenginleştirme ve katı besiyerine ekim aşamalarından oluşur ve var/yok testleri şeklindedir. Türk Gıda Kodeksi verilerine göre gıdalarda E.coli O157:H7 bakterisinin varlığı 25g örnekte araştırılır.
Aseptik şartlarda alınan ve soğuk zincir korunarak laboratuvara getirilen örnekler homojen hale getirilere, 25g’lık kısmı alınır ve 225 ml selektif sıvı bir besiyerinde 37°C’de 24 saat süreyle zenginleştirme işlemine tabii tutulur. İnkübasyon sonunda selektif ve ayırt edici bir katı besiyerine çift paralelli, sürme ve çizme yöntemleri ile ekim yapılarak, bu besiyerleri de 37°C’de 24 saat inkübasyona bırakılır. Petri florasındaki bazı bakteriler sorbitolü fermente ederlerken bazıları etmez ve petrilerde farklı renklerde koloniler ürer. E.coli O157:H7 şüpheli koloniler sorbitol negatif kolonilerden seçilip doğrulamaya gidilerek belirlenir.
Selektif katı besiyerinden elde edilen sorbitol negatif kolonilerden yapılacak doğrulama biyokimyasal testler yoluyla olabileceği gibi, doğrudan lateks agglutinasyon testi uygulanarak da yapılabilir. Bu yolla bakterinin E. coli O157 olduğu belirlenebilmektedir. Bakterinin E.coli O157:H7 olarak tanımlanabilmesi için H7 antiserumu ile mümkün olmaktadır.
Biyokimyasal doğrulamalarda E.coli O157:H7’nin karakteristik özellikleri
· Hidrojen sülfür negatif
· Voges Proskauer negatif
· Sorbitol negatif
· Laktoz pozitif
· Glikozdan gaz oluşumu pozitif
· İndol pozitif
· Metil red pozitif
· Hareket pozitif
· Lizin dekarboksilaz (LDC) pozitiftir.
Doğrulamalarda kullanılabilecek diğer bir yöntem lateks agglutinasyon testleri ise iki adet serum içermektedir. Test solusyonu E.coli O157 antijenine özel tavşan antikorları ile kaplanmış lateks partiküllerinden, kontrol serumu ise pre-immun tavşan globulinlerinden oluşur. Lateks agglutinasyon testinde şüpheli koloni ile karıştırılan kontrol serumunda herhangi bir değişiklik görülmezken, test serumunda oluşan agglutinasyon (kumlanma görüntüsü) E.coli O157’yi doğrular.
Klasik yöntemlerin zaman zaman yetersiz gelmesi ve refakatçi floranın maskelemesi sebebiyle yanlış negatifler sıklıkla görülmektedir; bu sebeple yeni ve hızlı analiz yöntemleri ağırlıklı olarak DNA esaslı testler ve immunoenzimatik yöntemler üzerine yoğunlaşmışlardır. Immunoassay, radioimmunoassay (RIA), fluorescent immunoassay (FIA), enzim immunoassay (EIA), immun peroksidaz testleri gibi testler güvenli ve hızlı sonuçlar verebilmektedir.
İmmunolojik belirleme ve identifikasyonda lateks agglutinasyon testleri ve ELISA sıklıkla kullanılmaktadır. Bu hassas testlerin sonucunda, antijen-antikor birleşmesş ile, 1 kob/g’dan daha az sayıda E.coli O157:H7 varlığı belirlenebilmektedir.
Son zamanlarda E.coli O157:H7 ve toksinleri PCR yöntemi ile de belirlenebilmektedir.
Diatek tarafından satın alabileceğiniz Hazır besiyerleri ve Toz besiyerleri analizlerinizde başarılı sonuçlar verir.